الفهرس 
ReviewOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 16 |  |  |
| | | from | 16 | | |
Abstract
تعتبر الخصوبة من أهم الصفات الإنتاجية للحيوان.ولكن هذه الصفة تعتبر معقدة إذ تتداخل وتتحكم فيها عدة عناصر أخرى مثل التغيرات البيئية والصحية والتغذية إضافة الى العامل الوراثي و هذا يمثل عائقا و صعوبة فى دراستها و يضيف تحديا امام العلماء للكشف الكامل عنها أو عن مسببات انخفاضها وفى الآونة الأخيرة زاد الاهتمام بالتحسين الوراثي للصفات التناسلية بالاضافة إلى ان التطوير في مجال علم الوراثة الجزيئية ساعد على دراسة الجينات الرئيسية المرتبطة بالخصوبة و التى يمكن استخدامها في التربية من خلال الانتخاب بمساعدة الدلالات الوراثية.
وتهدف الدراسة الحالية إلى التعرف على الطرز المتعددة للجينات المرتبطة بالخصوبة في الجاموس المصري وتوفير المعلومات حول الأليلات(Alleles) المرغوبة والأنماط الجينية للجينات المسئولة عن التحكم فى الغدد الصماء الخاصة بالخصوبة وكانت الجينات المرشحة في هذه الدراسة كل من مستقبلات الهرمون المحفز لهرمونات الغدة النخامية ((GnRHR والهرمون المنبه لنمو الجريباتFSHB)) و مستقبلات الهرمون المنبه لنمو الجريبات (FSHR) و هرمون التبويض (LHR).
تم جمع عينات دم من ثلاثمائة و واحد من إناث الجاموس المصري التى أتت إلى الوحدة البيطرية لعلاج مشاكل انخفاض الخصوبة أو تشخيص العشر بمحافظتى القليوبية (قرية ميت كنانة)، والمنوفية (مزرعة كلية الزراعة - جامعة المنوفية). تم تقسيم الحيوانات الى مجموعة ذات خصوبة طبيعية (مائة عينة)، و مجموعة تعانى من انخفاض الخصوبة (مائتان و واحد عينة) إما فى صورة انقطاع الشياع او تكرار للشياع الحيوان.
أٌجري الفحص للجهاز التناسلى لجميع الجاموس عبر المستقيم باستخدام جهاز الموجات فوق الصوتية قبل أخذ عينات من الدم كما تم قياس مستويات هرمون البروجستيرون فى بلازما الدم و تم استخلاص الحمض النووي من دم إناث الجاموس التى تعانى من مشاكل انخفاض الخصوبة بمسبباتها المختلفة. تم إكثار الجينات المرشحة للدراسة ( GnRHRو FSHBو FSHR وLHR) بواسطة اختبار البلمرة المتسلسل (PCR) و اختبار حجم المخرجات من التفاعل على جيل الاجاروز وتعريض مخرجات التفاعل لتقنية (Restriction fragment length polymorphism or RFLP) أو تقنية (Single-strand conformation polymorphism or SSCP) . كما تم تعريض مخرجات تفاعل البلمرةالمتسلسل للانزيمات الهاضمة. حيث تم هضم مخرجات التفاعل باستخدام إنزيم القطع (Alu1) و ((HhaI لــ جينات FSHR و LHR على التوالي. بينما تم استخدام تقنية SSCP بالنسبة للجينات GnRHR وFSHB. وتم التعرف على الطرز الجينية للنيوكليتدات الأحادية عن طريق تحليل تتابع الحامض النووى.
أظهرت نتائج الدراسة ما يلي:
أ)دلالات الخصوبة:
ارتفعت نسب الحيوانات المترددة القادمة للفحص نتيجة المشاكل التناسلية المختلفة في الصيف من المواسم الأخرى. وكانت النسبة الإجمالية لانقطاع و تكرار الشياع لدى الحيوانات 48.2٪ و 18.6٪على التوالي و انخفضت النسبة المئوية للحيوانات التى تعانى من انقطاع الشياع مع زيادة عدد من مرات الولادات السابقة في حين ارتفعت نسبة تكرار الشياع مع زيادة عدد الولادات.
ب) الموجات فوق الصوتية:
اظهر الفحص باستخدام الموجات فوق الصوتية ان الحيوانات التى تتميز بخصوبة طبيعية كانت مائة و سبعون من أصل ثلاثمائة و واحد بما يمثل نسبة 56.48٪. و قد لوحظت حالات مرضية مختلفة تؤثر على خصوبة الجاموس و كانت معدلات انتشار حالات خمول المبيض (9.63٪) والتهاب بطانة الرحم من الدرجة الأولى (7.64٪) هى الاكثر مصادفة بين مشاكل اضطرابات المبيض وبطانة الرحم فى الحيوانات على التوالي. وتميزت حالات خمول المبيض بان الجريبات السائدة و التى تليها بصغر حجمهما. كما أن الفرق بين هاتين الجريبيتين كان ضئيلاً ما يعنى فقدان صفة السيادة بين الجريبات و التى تٌميز النشاط المبيضى الطبيعى. وكان متوسط قطر قرن الرحم أكبر خلال مرحلة نمو الجريبات تليها مرحلة الجسم الأصفر، ثم الاقل كان فى حالات انخفاض نشاط المبيض.
جـ)هرمون البروجستيرون
اظهر قياس مستويات البروجستيرون فى البلازما حدوث ارتفاع ملحوظ فى متوسط مستوى الهرمون خلال مرحلة نشاط الجسم الأصفر(1.57 ± 0.18) بالمقارنة مع المرحلة الجرابية (5.78 ± 0.69) فى الحيوانات الطبيعية. علاوة على ذلك، لم تكن هناك فروق ذات دلالة إحصائية بين الحيوانات ذات الرحم الطبيعي و تلك التى كانت تعانى من التهاب بطانة الرحم المرتبطة او كانت تٌظهر انخفاض النشاط المبيضى.
د)الجينات المرتبطة بالخصوبة
1- جين مستقبلات الهرمون المحفز لهرمونات الغدة النخامية ((GnRHR
تم استخدام تقنية PCR-SSCP لدراسة الطرز الجينية المتعددة GnRHR ونتج عن تفاعل البلمرة المتسلسل شظية طولها 240 نيوكليتيدة مزدوجة. أظهرت نتائج التحليل باستخدام تقنية SSCP أن هناك تعدد فى الطرز الجينية لــ GnRHR، مع وجود ثلاثة أنماط مختلفة (AA، BB، وCC) في التركيب الوراثي للجاموس المصري. ارتبط نمطCC بخمول المبايض، بينما ارتبط نمط BB بالخصوبة الطبيعية للجاموس.
2- جين الهرمون المنبه لنمو الجريبات FSHB) )
تم استخدام تقنية PCR-SSCP لدراسة الطرز المتعددة لجين FSHB، و نتج عن استخدام تفاعل البلمرة المتسلسل شظية طولها 270 نيوكليتيدة مزدوجة. أظهرت نتائج التحليل باستخدام تقنية SSCP أن هناك تعدد فى الانماط الجينية لـ FSHB مع وجود نمطين (AA، و AB) في الجاموس المصري. ارتبط النمط الوراثي AA مع الخصوبة في الجاموس.
3- جين مستقبلات الهرمون المنبه لنمو الجريبات FSHR) )
تم استخدام تقنية PCR-RFLP لدراسة تعدد الطرز المتعددة لــFSHR و نتج عن استخدام تفاعل البلمرة المتسلسل شظية طولها 306 نيوكليتيدة مزدوجة ، و تقنية RFLP عن طريق الهضم بانزيم القطع (Alu 1). أظهرت النتائج أن جميع الجاموس (سواء الخصبة أو منخفضة الخصوبة) تمتلك نمط جينى مماثل هو CC.
4- جين مستقبلات هرمون التبويض (LHR)
تم استخدام تقنية PCR-RFLP لدراسة تعدد الطرز الجينية لــ LHR و نتج عن تفاعل البلمرة المتسلسل شظية طولها 303 نيوكليتيدة مزدوجة، و تقنية RFLP عن طريق الهضم بانزيم القطع (HhaI). أظهرت النتائج أن كلا من الجاموس الخصبة ومنخفضة الخصوبة تمتلك مورثات متماثلة مثل TT.
الخــــلاصة
من هذه النتائج يمكن ان نستخلص ان جينات مستقبلات GnRHR ، وFSHB متعددة الطرز الجينية بينما جينات FSHR، و LHR متماثلة التركيب الوراثى في الجاموس المصري. لذا تشير هذه النتائج إلى امكانية استخدام جينات GnRHR،و FSHB كدلالات جينية للخصوبة فى الجاموس.