الفهرس 
introductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 222 |  |  |
| | | from | 222 | | |
Abstract
الكوليبكتين و (Cnf 1) هي سيكلوموديولينات تنتجها الايشيريشيا كولاي المسببة للعدوي غير المعوية والايشيريشيا كولاي المعوية التي تستعمرقولون مرضى سرطان القولون والمستقيم (CRC). كل من تلك السموم تعزز من اليات العدوي للايشيريشيا كولاي، وتلعب دورًا في الاستعمار البكتيري وتطور العدوي المزمنة. أثبتت الدراسات الحديثة أن تلك السموم تهييء للتسرطن لأن كلاهما يأثر علي دورة الخلايا مما يأدي الي خلل في الوظائف الخلوية الطبيعية وتنشيط الطفرات. الكوليبكتين هو سم مشفر بجزء جينومي يبلغ 54 كيلو بايت (54Kb) تعرف باسم جزيرة pks ((pks island و يعمل الكوليبكتين علي تكسير الحمض النووي المزدوج (dsDNA) وتسرطن الخلايا. من الناحية أخرى ، يقع ال (Cnf 1) في اتجاه مصب للأوبيرون hlyCABD في جزيرة pathogenicity island II للايشيريشيا كولاي المسببة لأمراض الجهاز البولي ويؤدي إلى تنشيط بروتينات ال Rho و تعدد النواة داخل الخلايا.
في هذا العمل ، تم فحص انتشار Cnf 1 و الكوليبكتين بين عزلات الايشيريشيا كولاي المعزولة من مرضى المسالك البولية في مصر. بعد ذلك، تم الكشف عن تأثير العوامل المضادة للبكتيريا عند تركيزات غير مثبطة للنمو و جرعات منخفضة من أشعة جاما على السمية الخلوية لسلالة من سلالات الايشيريشيا كولاي المسببة لعدوي الجهاز البولي وعلي التعبير الجيني للكوليبكتين. بالإضافة إلى ذلك ، تم فحص الآثار المرضية المرتبطة بإنتاج كل من تلك السيكلومودولينات في نموذج حيواني.
تم تقسيم تلك الدراسة إلى قسمين، التجارب المعملية خارج العائل ((in vitro و النماذج التجريبية بداخل الجسم الحي ((in vivo. شمل النموذج المعملي خارج العائل ما يلي: (i) عزل وتعريف و الكشف عن القدرة علي تحليل كرات الدم الحمراء لعزلات ايشيريشيا كولاي مسببة لأمراض المسالك البولية، (ii) اكتشاف السمات المظهرية المميزة للكوليبكتين و ال Cnf 1 على خلايا الثدييات المستنبتة بالمعمل (خلايا HeLa و Hep2 و Vero و (Caco2،(iii) الكشف عن الخصائص الوراثية لتلك السموم (جينات cnf 1 ، clbA و clbQ) في عزلات الايشيريشيا كولاي بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل، (iv) اختبار تأثير المعالجة بعوامل مضادات البكتيريا عند تركيزات غير مثبطة للنمو وجرعات منخفضة من إشعاعات الجاما على السمية الخلوية لـعزلة من عزلات الايشيريشيا كولاي ذات القدرة علي افراز Cnf1 و الكوليبكتين والتعبير الجيني للكوليبكتين باستخدام فحوصات السمية الخلوية MTT و ال RT-PCR، على الترتيب. تم استخدام التحليلات المعلوماتية الحيوية ((bioinformatics analyses في هذه الدراسة للكشف عن انتشار كلا السميين بين أنواع البكتيريا ذات الصلة وغير ذات صلة بالايشيريشيا كولاي. تم إجراء النموذج التجريبي داخل جسم حي باستخدام فئران اناث عن طريق نموذج عدوي الجهاز البولي التصاعدي (تلقيح عبر الإحليل) لاستقصاء التأثير المرضي المرتبط بإنتاج السميين.
تم عزل 160 سلالة بكتيرية من مرضى المسالك البولية، وتم تعريف 125 عزلة فقط على أنها ايشيريشيا كولاي .من بين هذه العزلات، أظهرت 21 عزلة قدرتها علي تحليل كرات الدم الحمراء hemolytic و 10 فقط احتوت على الجينات المشفرة لتلك السيكلوموديولينات. عند اختبار سمية ناتج تحلل الخلايا الخام و معلق الخلايا لعزلات الايشيريشيا كولاي ذات القدرة علي تحليل كرات الدم الحمراء على خلايا الثدييات المستنبتة، لوحظ أن سبعة فقط من أصل العشر اللاتي تحتوي جينات تلك السيكلوموديولينات أظهرت المظاهر السمية لتلك للسميين (تضخم الخلايا وتعدد الأنوية) في الخلايا المستزرعة.
اعتمد النموذج الحيواني داخل العائل على استخدام أربعة عزلات من الايشيريشيا كولاي لتلقيح الفئران عبر الإحليل. كانت عزلات الايشيريشيا كولاي الأربعة المستخدمة إما محللة
لكرات الدم الحمراء وحاوية للجينات المشفرة للسميين أو محللة أو غير محللة و لكنها تخلو من الجينات المشفرة للسميين. بعد التلقيح عبر الإحليل ، تم ذبح الجرذان واستخلاص الكلى والمثانة وفحص الأنسجة. ومن الجدير بالذكر أن أشد الالتهابات، والتغيرات التضخمية والسمية الوراثية في الكلى والمثانة لوحظت في الفئران المصابة بالعزلات الحاملة لجينات السميين +cnf1 + clbA + clbQ. تشير التغيرات التضخمية والسمية الوراثية الناتجة عن عزلات cnf1 + clbA + clbQ+ مع غيابها التام في الفئران المصابة بعزلات محللة أو غير محللة لكرات الدم الحمراء خالية من الجينات المشفرة للسميين، إلى تورط هذيين السميين في ظهور تلك الآثار المرضية.
من عزلات الايشيريشيا كولاي السبعة التي أبدت ايجابية في الخصائص المظهرية و الجينية للسميين، تم اختيار عزلة واحدة لفحص تأثير العوامل المضادة للبكتيريا عند تركيزات غير مثبطة للنمو و جرعات منخفضة من إشعاع الجاما على إنتاج Cnf 1 و الكوليبكتين. تم انماء عزلة الايشيريشيا كولاي المختارة في وجود ليفوفلوكساسين، وسيبروفلوكساسين، وسيفترايكسون، وترايميثوبريم / سلفاميثوكسازول عند تركيزات غير مثبطة لنمو الخلايا. تم اختبار سمية كل من معلق الخلايا و ناتج تحلل الخلايا الخام. وبالمثل ، تم تشعيع نمو حديث من العزلة المختارة وفحص سميته باستخدام كل من معلق الخلايا و ناتج تحلل الخلايا الخام. علاوة على ذلك، تم تقييم تأثير التركيزات غير المثبطة لمضادات البكتيريا والجرعات المنخفضة من أشعة الجاما على التعبير الجيني للكوليبكتين (جينات clbA ، clbQ و clbM) باستخدام RT-PCR.