الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 143 |  |  |
| | | from | 143 | | |
Abstract
مقدمة البحـــث : تعتبر المكورات السبحية الرئوية واحدة من أهم الكائنات الحية المسؤولة عن عدد وافر من الامراض الشائعة مثل الالتهاب الرئوى و التهاب الاذن الوسطى و الالتهاب السحائى و قد تصل الى تسمم الدم و الفشل المتعدد لاجهزة الجسم . عدوى المكورات السبحية الرئوية تكون مصحوبة بارتفاع معدلات المرض و الوفيات خاصة بين الفئات العمرية للاطفال و كبار السن فوق سن الستين. الهدف من البحـــث: تهدف هذه الدراسة إلي تحضير عدد من اللقاحات المضادة(antigen vaccines) للمكورات السبحية الرئوية باستخدام تكنولوچيا الحمض النووي المركب (Recombinant DNA technology خطة البحـــث فصل الحمض النووي من عترة بالمكورات السبحية الرئوية D39و من ثم استخدام تفاعل البلمرة المتسلسل(PCR) للتعرف عليها و مضاعفة كلا من جيناتPly & D3-4, باستخدام بوادئ مخصصة لكل منها وإنزيم البلمرة عالي الــدقة. تم فصل كل منتج من منتجات التضخيم باستخدام الترحيل الكهربائي ومن ثم قطع منتجات التضخيم من هولام الأجاروزوتنقيتها باستخدام طقم .Qiaex IIQiaex II نتـــائـــج البحـــــــــــــث : تتميز منتجات التضخيم التي تم مضاعفتها باستخدام إنزيم البلمـرة عالي الدقـة بأن لها نهايات حادة ولذلك فانه تم اضافة ذيل من الأدنينA-tailing))عند النهاية الثالثة (3’)لكل منها باستخدام طريقة كوبس (Kobs)عام 1997. لصق كل منتج من منتجات التضخيم المعدلة علي حدة إلي ناقل التكثير cloning vector)) pGEM-T Easy وفقا لدليل شركة بروميجا التقني. تــم تحـويل(Transformation) هـذه النـواقل المؤتلفة في بكتريا عصويات القولون E. coli DH5α باستخدام طـريقة سامبروك و روسيل (Sambrook and Russell) عام 2001. ولقد تم انتخاب البـكتريا المـحولة علي أطباق من أجـارLB/amp/X-gal/IPTG بــطريقة فـرز الأبيـض من الأزرق (Blue-white screening)وبعد ذلك التقطت بعض المستعمرات البيضاء وتم فصل البلازميدات المؤتلفة منها باستخدام طقم استخراج البلازميد. وللتأكد من وجود الجينات المعنية أو منتجات التضخيم في البلازميدات المفصولة تم قطع هذه البلازميدات بإنزيم التقيد BamH1 و Xho1 (restriction enzyme).
خلاصــــة البحـــــث : بعد انقضاء فترة أربع أسابيع على الجرعة المعززة الأخيرة للقاح, قمنا بإجراء إختبار تحدي Challenge test)) بإصابة جميع الفئران المحصنة و الغير محصنة عبر الأنف باستخدام جرعة قاتلة (1x106 CFU/mouse) من عترة (المكورات السبحية الرئوية). كما تم سحب عينة دم من كل مجموعة وقمنا برصد نسبة الفئران الحية ضمن المجموعة المحصنة خلال أسبوع و مقارنتها بالمجموعة الغير محصنة. بعد انقضاء 72 ساعة بلغت نسبة الوفاة 90% فى فئران المجموعة الغير محصنة بينما انخفضت نسبة الوفاة إلى 30 و 50% فى المجموعة المحصنة ب Ply او D3-4 على التوالى, بالاضافة الى ذلك أظهرت الفئران المحصنة باستخدام (بروتين Ply و D3-4) حمل بكتيرى أقل فى الدم و أنسجة الرئة مقارنة بالمجموعة الغير محصنة.تظهر تلك النتيجة بوضوح أن استخدام بروتين ply و D3-4 يحفز استجابة مناعية واضحة ضد عدوى المكورات الرئوية.