الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 294 |  |  |
| | | from | 294 | | |
Abstract
يعتبر السيكلوفوسفاميد (CP) هو عامل قلوي قوي يستخدم على نطاق واسع كمضاد للسرطان ضد أنواع مختلفة من الأورام البشرية وهو أيضا له تأثيرات مناعية. ولقد ارتبط استخدام CP بتأثيرات سامة متعددة علي أعضاء مختلفة وتتسبب الجرعة العالية من السيكلوفوسفاميد (200 مجم/ كجم من وزن الجسم) في احداث سمية القلب الحادة التي قد تتراوح بين اصابة الخلايا البطانية و التهاب عضلة القلب وعدم انتظام ضربات القلب مما يؤدي إلى مضاعفات مثل قصور القلب الاحتقاني وضعف نشاط عضلة القلب.
يتم التمثيل الغذائى للسيكلوفوسفاميد بواسطة إنزيم السيتوكروم بي 450 إلى مركبين نشطين مثل الفوسفوراميد و الأكرولين. كما أن للفوسفوراميد و الأكرولين تأثيرات سامة على الخلايا الطبيعية وينشط الأكرولين أنواع الشقوق الحرة ويحث على تكوين البيروكسي نيتريت الذي يتلف بشدة البروتينات والدهون والحمض النووي في الخلية. وأيضا السيكلوفوسفاميد يسبب السمية الكبدية والجينية وسمية الرئة والسمية الكلوية و القلبية.
تلعب المنتجات الطبيعية حاليًا دورًا مهمًا في الوقاية من أمراض القلب والأوعية الدموية والحد منها وعلاجها نظرًا لقدرتها على التخلص من الشقوق الحرة وتعتبر بذور العنب وقشور اليوسفي من بين المنتجات الطبيعية التي لها تأثير وقائي للقلب ضد سمية السيكلوفوسفاميد بسبب خصائصها المضادة للأكسدة و موت الخلايا المبرمج والالتهابات.
يعتبر العنب (Vitis vinifera L.) أحد أفراد عائلة vitaceae وهو أحد محاصيل الفاكهة المزروعة على نطاق واسع والأكثر أهمية في العالم ويستخدم بشكل أساسي لانتاج العصير وخاصة في صناعة النبيذ وتعد بذور العنب من أغنى مصادر البروانثوسيانيدينز حيث تكون هذه القوة المضادة للأكسدة أكبر بـ 20 مرة من فيتامين ه و 50 مرة من فيتامين ج وكلماأغمق لون قشر العنب كلما احتوي علي نسبة عالية من مادة الفلافونويد.
كما يحتوي مستخلص بذور العنب (GSE) على عدد من البوليفينولات (بروسيانيدينز وبروانثوسيانيدين) كما أظهرت الدراسات الدوائية المختلفة الخصائص المضادة للالتهابات والمضادة للاكسدة والمضادة للأورام والمضادة للبكتيريا والخصائص الواقية للكبد في بذور العنب.
تعتبر الموالح احدي أكثر المحاصيل الغذائية شعبية في العالم لقيمتها الغذائية والعلاجية وكما أنها تعتبر من المحاصيل التي تستخدم بشكل رئيسي في الصناعات الغذائية لإنتاج العصير الطازج ويحتوي قشر الثمرة علي تركيز أعلى من المواد المضادة للأكسدة عن لحم الثمرة. وتعتبرقشورالموالح من المصادرالغنية بالمركبات الفينولية وخاصة الفلافونات الايزوفلافونات الفلافونونات الفلافونولات والأنثوسيانيدين بينما قشر البرتقال يحتوي علي الفلافانونات (naringenin و hesperitin) والكاروتينات وحامض الأسكوربيك التي لها دور في الحماية من أمراض القلب والأوعية الدموية.
يعتبر اليوسفي(Citrus reticulate. L) مثل الموالح الأخرى له أهمية غذائية لوجود بعض المركبات ومنها الفلافونويد ، وخاصة الفلافونز polymethoxy والفلافونينات (hesperidin، narirutin و naringin) وهذه المركبات موجوده بلب وقشر الثمره. كما تم أيضًا تحديد الأحماض الفينولية في المنتجات الثانويه للحمضيات بعد انتاج العصير مثل أحماض الكافيين ، والكوماريك ، والفريوليك ، والسينابيك. تم تقدير نوعين من الفلافونويد (ناروتين وهيسبيريدين) في مستخلصات قشور اليوسفي.
الهدف من هذه الدراسة هو تقييم محتوي الفينولات الكلية والفلافونيدات وتحديد المركبات الحيوية النشطه لمستخلص بذور العنب وقشور اليوسفي وأيضًا تقييم الدور الوقائي لبذور العنب وقشور اليوسفي كمضادات أكسدة قوية ومضادات الالتهابات وكمضادات لموت الخلايا المبرمج على سمية القلب المحدثة بواسطة السيكلوفوسفاميد في الجرذان وأيضا لتحديد الدور الوقائي لكل منهما ضد التسمم المحدث بواسطة السيكلوفوسفاميد وذلك يرجع لتأثيرهم المضاد للأكسدة والالتهابات والحصائص المضادة للموت المبرمج للخلايا.
ولقد تم تجهيز مستخلصات بذور العنب وقشور اليوسفي لتقدير الفينولات والفلافونيدات الكلية كما تم تحرير بذور العنب من القشرة وتجفيفها تحت الظل
وطحنها في الخلاط. وتم استخلاص مائة جرام من مسحوق بذور العنب باستخدام الإيثانول (70%) عند 50 إلى 60 درجة مئوية في جهاز سوكسليت لمدة 72 ساعة. تم وضع مستخلص بذورالعنب في زجاجة داكنة وتخزينه في الثلاجة عند -20 درجة مئوية كما تم غسل مائة جرام من قشور الماندرين و تنظيفها تمامًا وتقشيرها يدويًا. تم تجفيف القشور بأشعة الشمس لمدة سبعة أيام حتى الحصول على وزن ثابت ثم تم طحن القشور الجافة للحصول على مسحوق بواسطة مطحنة كهربائية كما تم استخلاص المسحوق باستخدام الايثانول (70%) لمدة 72 ساعة ثم تم ترشيح المستخلص وتبخيره وتم وضعه في زجاجة داكنة وتخزينه في الثلاجة عند -20 درجة مئوية.
ولقد تم إحداث سمية القلب في الجرذان عن طريق الحقن داخل االغشاء البريتوني حيث تم اذابة 1 جرام من السيكلوفوسفاميد في 10 مل من محلول ملحي(9,. %) مباشرة قبل الإعطاء للجرذان بالجرعة (200 مجم / كجم من وزن الجسم) في نهاية الأسبوع السادس من التجربة.
التجربه العملية:
تم استخدام ستون من ذكورجرذان سلالة سبراجو داولي البالغة حيث يتراوح أوزنها ما بين (150-180 جم) وتم حصولها على الوجبه التجاريه وماء للشرب بحريه لمدة 6 أسابيع كما تم تقسيمهم إلى ست مجموعات كل مجموعة تتكون من 10 جرذان وتم استخدام 1 جم من كل من مستخلص بذور العنب وقشور اليوسفي في عمل معلق في 10 مل من الماء المقطر وتم اعطاءهم للجرذان حسب وزن الجسم وكانت المجموعات كالتالي: المجموعة (1) المجموعه الضابطه : تم إعطاء الجرذان ماء مقطر يومياً (2.5 مل/كجم من وزن الجسم) عن طريق الفم بالانبوب المعدي لمدة 6 أسابيع وحقنها فى الغشاء البريتوني بجرعة واحدة من المحلول الملحي (0.9٪) (2.5 مل / كجم من وزن الجسم) في نهاية الأسبوع السادس من التجربة. أما المجموعة (2): تم إعطاء الجرذان ماء مقطر عن طريق الفم وحقنت بجرعة وحيدة من السيكلوفوسفاميد (200 مجم / كجم من وزن الجسم) المذاب في محلول ملحي(0.9٪) في نهاية الأسبوع السادس من التجربة. بينما المجموعتان (3 و 4): تم اعطاء الجرذان مستخلص بذور العنب بجرعات منخفضة وعالية (150 و 300 مجم / كجم من وزن الجسم) على التوالي يومياً عن طريق الفم بالانبوب المعدي لمدة 6 أسابيع ثم حقنها بالسيكلوفوسفاميد مثل مجموعة 2 و المجموعتان (5 و 6): تم اعطاء الجرذان مستخلص قشور اليوسفي
بجرعات منخفضة وعالية (150 و 300 ملجم / كجم من وزن الجسم) على التوالي يومياً عن طريق الفم لمدة 6 أسابيع ثم حقنها بالسيكلوفوسفاميد مثل مجموعة 2.
اثناء فترة التجربة , تم تسجيل كمية الغذاء المتناولة ووزن الجرذان أسبوعيا حيث تم حساب التغيرفي وزن الجسم ونسبة كفاءة الغذاء.
في نهاية فترة التجربة (6 أسابيع) وبعد الصيام طوال الليل , تم وزن الجرذان وتخديرها تحت تأثير الإيثر بعد 24 ساعة من حقن السيكلوفوسفاميد وجمعت عينات الدم من الوريد الكبدي وذلك للحصول علي المصل واستخدامه في التحاليل الكيميائيه و تم أخذ القلب والكبد من الجرذان للتحاليل الكيميائية الحيوية والفحص المجهري على التوالي.
تتلخص نتائج الدراسة الحالية في الآتي:
1- محتوى الفينولات الكلية والفلافونويدات والمركبات الحيوية النشطه في بذور العنب وقشور اليوسفي:
• أظهرت النتائج أن جرامًا واحدًا من مستخلص بذور العنب يحتوي على (93.25 ± 2.91 مجم كـحمض جاليك مكافئ GAE) من إجمالي الفينولات و (75.13 ± 1.50 مجم كـ روتين مكافئ RE) من إجمالي مركبات الفلافونويد. بينما يحتوي جرام واحد من مستخلص قشور اليوسفي على (24.50 ± 8.08 مجم كـ GAE) من إجمالي الفينولات و (2.89 ± 0.19 مجم كـ RE) من إجمالي مركبات الفلافونويد.
• بينما أظهرت النتائج أن حامض Protocatechuic يمثل أعلى نسبة من مكونات بذور العنب الفينولية بالمقارنة مع جميع المركبات الأخرى ، بينما Hesperidin كان يمثل أقل نسبة. علي الجانب الاخر يمثل Hesperidin أعلى نسبة من مكونات قشور اليوسفي الفينولية عند مقارنته مع جميع المركبات الأخرى وكان Rutin يمثل أقل نسبة.
2- نتائج القياسات البيولوجية
تسبب إعطاء السيكلوفوسفاميد للجرذان الي انخفاض كبير في وزن الجسم ، كمية الطعام المتناول ، بينما زاد وزن القلب المطلق والنسبي بصوره طفيفه. كما أظهرت
الجرذان المحقونة بالسيكلوفوسفاميد والمعاملة بمستخلص بذور العنب (الجرعات المنخفضة والعالية) الي ارتفاعًا ملحوظًا في وزن الجسم ، والغذاء المتناول وانخفاض في الوزن المطلق و النسبي للقلب. بينما أظهرت الجرذان المحقونة بالسيكلوفوسفاميد والمعاملة بالجرعة العالية من قشور اليوسفي الي ارتفاعًا ملحوظًا في وزن الجسم وانخفاض في الوزن المطلق و النسبي للقلب.
3- نتائج التحاليل الكيميائية الحيوية
• أظهرت نتائج وظائف القلب أن الحقن بجرعة واحدة من السكلوفوسفاميد في الغشاء البريتوني أدي إلى زيادة معنوية في أنشطة انزيمات ALT و AST و ALK-P و LDH و CK-MB و CK في الدم. بينما أدى إعطاء مستخلص بذور العنب وقشور الماندرين (الجرعات المنخفضة أو العالية) مع السيكلوفوسفاميد إلى خفض أنشطة إنزيمات القلب عند مقارنتها بمجموعة السيكلوفوسفاميد. لوحظ أن التأثير المحسن الأكثر أهمية على مستوي نشاط AST و CK في الجرعة العالية من مستخلص قشور اليوسفي بينما في مصل الدم ALT و LDH و CK-MB نشاط في مصل الدم كان في الجرعة العالية من مستخلص بذور العنب مقارنة بمجموعة السيكلوفوسفاميد.
• أظهرت نتائج حالة التأكسد ومضادات الأكسدة أن الحقن باستخدام السيكلوفوسفاميد أدي الي ارتفاع ملحوظ بمستوى MDA في المصل وانخفاض مستوى TAC في مصل الدم وأنشطة انزيمات CAT و SOD و GPx في القلب نتيجة الجهد التأكسدي الناجم عن السيكلوفوسفاميد. علاج الجرذان المسممه بالـسيكلوفوسفاميد مع مستخلص بذور العنب وقشور اليوسفي (الجرعات المنخفضة والعالية) أدي إلى تقليل الجهد التأكسدي الناجم عن السيكلوفوسفاميد وتسبب في تحسين كبير في مستوى TAC في المصل وأنشطة انزيمات CAT ، و SOD GPxفي القلب. وقد لوحظ أفضل تحسن
في مستويات MDA و TAC وأنشطة أنزيمات CAT و SOD و GPx القلبية في المجموعة المعاملة بمستخلص بذور العنب وقشور اليوسفي ذات الجرعة العالية مقارنة بمجموعة السيكلوفوسفاميد.
• أظهرت النتائج الحالية لدلالات موت الخلايا المبرمج في خلايا القلب أن سمية السيكلوفوسفاميد أدت إلى زيادة هائلة في مستويات p53 و caspase3 و تكسير DNA في القلب. بينما حدث انخفاض كبير في مستوى Bcl-2 في القلب بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ولوحظ من النتائج أن علاج الجرذان المسممه بالسيكلوفوسفاميد بمستخلص بذور العنب وقشوراليوسفي (الجرعات المنخفضة والعالية) أدي إلى تحسن كبير في مستويات p53 و caspase-3 و Bcl-2 وتكسير DNA في القلب عند مقارنتها بمجموعة السيكلوفوسفاميد وقد لوحظ أفضل تحسن في مستويات p53 و caspase 3 وتكسير DNAفي مجموعات مستخلص بذور العنب وقشور اليوسفي ذات الجرعة العالية مقارنة بمجموعة السيكلوفوسفاميد.
4- الفحص المجهري
أظهر الفحص الميكرسكوبي لأنسجة القلب في الجرذان من مجموعة السيكلوفوسفاميد أنه يؤثر على خلايا عضلة القلب في شكل فجوة السيتوبلازم لخلايا عضلة القلب وأستسقاء بين خلايا عضلة القلب المرتبطة بارتشاح الخلايا الالتهابية وحيدة النواة. بينما أظهرت المعاملة بمستخلص بذور العنب وقشور اليوسفي للجرذان تحسنًا كبيرًا. أظهرت الجرذان في مجموعة السيكلوفوسفاميد والتي تناولت جرعات منخفضة من مستخلص بذور العنب وقشور اليوسفي استسقاء طفيف بين خلايا عضلة القلب. بينما أظهرت الجرذان المسممه التي تناولت جرعات عالية من مستخلص بذور العنب وقشور اليوسفي عدم وجود تغيرات في الأنسجة.
أظهر الفحص المجهري لأنسجة الكبد من مجموعة السيكلوفوسفاميد تنشيط خلايا كوبفر والتجمع الدهني في الخلايا الكبدية والنسيج الليفي حول القناة الصفراوية المرتبط بارتشاح الخلايا الالتهابية وحيدة النواة في البوابة الثلاثية. أظهرت الجرذان المسممة التي تناولت جرعة منخفضة من مستخلص بذور العنب تنكرز الخلايا الكبدية
البؤري المرتبط بارتشاح الخلايا الالتهابية. من ناحية أخرى ، أظهر إعطاء جرعة عالية من مستخلص بذور العنب احتقان طفيف في الوريد المركزي والجيوب الكبدية.
أظهرت الجرذان المسممة بالسيكلوفوسفاميد والتي تناولت جرعة منخفضة من مستحلص قشور اليوسفي تضخم طفيف في النسيج الطلائي الصفراوي واستسقاء في
البوابة الثلاثية. بينما أظهرت أقسام الكبد في الجرذان المعطاة بجرعة عالية من مستخلص قشور اليوسفي تحطم فجوي لخلايا الكبد البؤرية.