الفهرس 
Co-morbidities with SLEOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 198 |  |  |
| | | from | 198 | | |
Abstract
الذئبة الحمراء هي مرض مناعي ذاتي متعدد العوامل وغير متجانس، يتم وصفه عن طريق عرض المستضدات الذاتية والإفراط في إنتاج الأجسام المضادة الذاتية المسببة للأمراض. تؤثر هذه المضاعفات في الغالب على النساء في سنوات الإنجاب. يزداد خطر الإصابة بمرض الذئبة الحمراء أثناء الحمل وينخفض بعد انقطاع الطمث.
لا تزال مسببات الذئبة الحمراء غير معروفة، لكن التفاعل المعقد بين العوامل الوراثية والبيئية والهرمونية يزيد من الخلل المناعي المرتبط بالمرض.
من بين العوامل الهرمونية الهرمونات الجنسية الأنثوية، والأهم من ذلك، يتم إنتاج هرمون الاستروجين داخليًا في الغالب خلال سنوات الإنجاب. وجدت بعض الدراسات أن هرمون الاستروجين ينشط الخلايا البائية الطرفية الناضجة وقد يزيد من إنتاج الأجسام المضادة للجلوبيولين المناعي G ضد حمض ديوكسي ريبونوكلييك مزدوج، لكن أظهرت دراسات أخرى زيادة مستويات مستقبلات هرمون الاستروجين α messenger RNA ، وهذا التعبير الأعلى يمكن أن يسبب استجابة مختلفة لهذا الهرمون مما يؤدي إلى مسار إشارات الاستروجين المفرط النشاط ، مع دور مسبب للمرض.
هناك نوعان مختلفان من مستقبلات الإستروجين، ERα و ERβ ، والتي لها خصائص هيكلية وتعمل كمستقبلات نووية التي من خلالها يتوسط الإستروجين في تأثيرها.
تم وصف تعدد أشكال مستقبلات الأستروجين ألفا على أنها مرتبطة بأمراض مختلفة بما في ذلك مرض الذئبة الحمراء، وقد تم الإبلاغ عن ارتباط Pvull C / T و XbaI A / G مع حساسية SLE والمظاهر السريرية في العديد من الدراسات.
الهدف من الدراسة
كان الهدف من هذه الدراسة هو تحديد تعدد الأشكال الجيني لمستقبلات هرمون الاستروجين في مرضى الذئبة الحمراء والتحقيق في تأثيرها المحتمل على نشاط وشدة المظاهر السريرية لهذا المرض.
1) التصميم الفني:
تصميم الدراسة: دراسة حالة.
أجريت هذه الدراسة على 30 مريضاً و20 شخصاً تم توزيعهم على مجموعتين:
المجموعة (1): بما في ذلك 30 مريضة مصابة بالذئبة الحمراء تستوفي معايير تصنيف العيادات المتعاونة الدولية لمرض الذئبة الحمراء لعام 2012. (الملحق الأول)
(4 من 17 معيارًا)، بما في ذلك معيار سريري واحد على الأقل ومعيار مناعي واحد؛ التهاب الكلية الذئبي المثبت بالخزعة أويتم تصنيف المريض على أنه مصاب بمرض الذئبة الحمراء إذا استوفى أربعة من المعايير السريرية والمناعية المستخدمة في معايير تصنيف العيادات الدولية المتعاونة لوبوس، بما في ذلك معيار سريري واحد على الأقل ومعيار مناعي واحد.
بدلاً من ذلك، وفقًا لمعايير تصنيف العيادات التعاونية الدولية لمرض الذئبة الحمراء، يتم تصنيف المريضة على أنها مصابة بمرض الذئبة الحمراء إذا كانت لديها خزعة التهاب الكلية المتوافق مع مرض الذئبة الحمراء في وجود الأجسام المضادة للنواة أو الأجسام المضادة لـ dsDNA.
المجموعة (2): عشرون من الإناث الأصحاء مع عدم وجود تاريخ معروف للإصابة بأمراض المناعة الذاتية كمجموعة ضابطة.
تم اختيار كل من المرضى ومجموعات المراقبة من عيادة المرضى الداخليين والخارجيين بقسم أمراض الروماتيزم وإعادة التأهيل والطب الطبيعي، جامعة بنها من يناير 2019 إلى يناير 2021.
معايير الاستبعاد:
•تم استبعاد المرضى والنساء الأصحاء اللاتي يتناولن العلاج بالهرمونات البديلة أو أقراص منع الحمل.
•المرضى الذين يعانون من أمراض المناعة الذاتية الأخرى.
تعرض جميع المرضى لـ:
(أ) التقييم السريري:
I- أخذ التاريخ الكامل:
1. البيانات الشخصية:
•اسم المريض الكامل والجنس.
•العمر،
•سكن
•الحالة الاجتماعية،
•عادات خاصة ذات أهمية طبية.
•مدة المرض
3-الشكوى / الشكاوى:
مأخوذة على لسان المريض.
4-التاريخ الحالي:
•تحليل شكوى المريض.
•العمر عند بداية المرض.
•دورة المرض ومدته.
2. تاريخ الدورة الشهرية والتوليد:
•عدد حالات الحمل السابقة إن وجدت.
•خسارة سابقة للجنين إن وجدت، سواء كانت عمليات إجهاض أو وفيات جنينية داخل الرحم.
•وجود انقطاع الطمث (سنة أو ثانية).
5. التاريخ الماضي:
•التاريخ السابق للعمليات.
•دخول سابق إلى المستشفى (التاريخ والأسباب).
•التاريخ السابق للأمراض الطبية المزمنة.
•الأدوية السابقة (الأدوية، الجرعات، مدة الاستهلاك، الآثار الضارة، دليل على الحساسية للأدوية).
6. تاريخ العائلة:
تاريخ من ظروف مماثلة في الأسرة.
الفحص السريري الثاني:
•العلامات الحيوية: درجة الحرارة، ضغط الدم، النبض ومعدل التنفس.
•فحص العينين والفم: لإثبات التهاب الملتحمة والتهاب قزحية العين وتقرحات الفم والعدوى الفطرية واحمرار الحنك.
•فحص الجلد: للثعلبة، حمامي الملاريا، القرحة، طفح جلدي وعائي، نمشات وكدمات.
•الفحص المفصلي: تم فحص مفاصل الجسم بدقة مع الفحص البدني المفصلي الروتيني الذي تضمن الفحص والجس والحركات والاختبارات الخاصة للكشف.
•فحص العضلات: تم فحص العضلات من حيث التناغم والتورم والتقلص والقوة الحركية.
•فحص الصدر: تسمع الاحتكاك الجنبي، أصوات التنفس، الخفقان والصفير.
•فحص القلب: تسمع لأصوات القلب (معدل ونبض)، أصوات إضافية (نفخات).
•الفحص العصبي: الحالة العقلية، القوة الحركية، الأحاسيس، ردود الفعل السطحية والعميقة.
•فحص البطن: للكشف عن تضخم الأعضاء والاستسقاء.
•فحص الغدد الليمفاوية والنبضات الطرفية.
تقييم نشاط المرض باستخدام مؤشر نشاط مرض الذئبة الحمامية الجهازية. الملحق الثاني:
يقيس مؤشر نشاط مرض الذئبة الحمراء نشاط المرض بناءً على 24 سؤالاً لتقييم المظاهر السريرية لمرض الذئبة الحمراء، بما في ذلك النتائج الفيزيائية والقيم المختبرية الموزونة عبر أنظمة الأعضاء.
الحد الأقصى للدرجة التي يمكن تحقيقها هو 105، وقد تم تحديد فئات النشاط على أساس درجات مؤشر نشاط مرض الذئبة الحمراء على النحو التالي: لا يوجد نشاط (SLEDAI = 0)، نشاط خفيف (SLEDAI = 1 إلى 5)، نشاط معتدل (SLEDAI = 6 إلى 10)، نشاط مرتفع (SLEDAI = 11 إلى 19)، نشاط مرتفع جدًا (SLEDAI≥20).
تقييم شدة المرض باستخدام درجة مؤشر الضرر SLICC / ACR؛ الملحق الثالث:
تم تطوير عيادات الذئبة الدولية النظامية المتعاونة مع الكلية الأمريكية لأمراض الروماتيزم (SLICC / ACR DI) لتقدير الضرر (التغيير غير القابل للعكس، غير المرتبط بالالتهاب النشط) الذي يحدث منذ ظهور مرض الذئبة، والذي تم التأكد منه من خلال التقييم السريري وهو موجود لمدة 6 أشهر على الأقل ما لم ينص على خلاف ذلك. يجب أن تحدث نوبات متكررة على الأقل 6 أشهر متباعدة حتى تسجل 2. نفس الآفة لا يمكن تسجيلها مرتين. لقد ثبت أنه مقياس صالح للضرر ويرتبط بالوفيات.
(ب) الفحوصات المخبرية:
جمع عينات الدم
تم الحصول على عينات الدم الوريدي المحيطي (2 سم) في ظل ظروف معقمة كاملة وقسمت إلى جزئين:
تم جمع الجزء الأول في أنبوب عادي، وتم السماح له بالتخثر والطرد المركزي عند 3000 دورة في الدقيقة. تم فصل الأمصال الناتجة، وتجميعها في أنابيب إبندورف نظيفة وتخزينها عند -80 درجة مئوية حتى تقدير:
1-الفحوصات المخبرية الروتينية والمناعة الذاتية:
•معدل ترسيب كرات الدم الحمراء: تم التقدير بطريقة Westergren المسجلة بالملليمتر / الساعة. تم أخذ قراءة الساعة الأولى.
•صورة دم كاملة: باستخدام كولتر آلي.
•تحليل مصل الكرياتينين واليوريا في الدم باستخدام جهاز التحليل التلقائي Hitachi 917.
•الأجسام المضادة للنواة بتقنية الوميض المناعي.
•الأجسام المضادة للحمض النووي الريبي منقوص الأكسجين عن طريق تقنية التوهج المناعي غير المباشر.
•التحديد الكمي لمستويات المصل التكميلي (C3، C4) بواسطة مقياس النوى. القيم الطبيعية (C3: 90-180 مجم / ديسيلتر)، (C4: 10-40 مجم / ديسيلتر).
•تحليل كامل للبول: كرات الدم الحمراء، تعداد كرات الدم البيضاء، القوالب (هيالين، حبيبات، كرات الدم الحمراء، كرات الدم البيضاء).
•بروتين بول لمدة 24 ساعة: المستويات الطبيعية عند البالغين أقل من 150 مجم / يوم
•علامات APL (الذئبة المضادة للتخثر aCL IgG وIgM).
2- قياس تركيز هرمون الاستروجين في الدم: بواسطة فيداس. مستويات استراديول الطبيعية هي: 30 إلى 400 بيكوغرام / مل للنساء في فترة ما قبل انقطاع الطمث.
يتم جمع الجزء الثاني في أنابيب مفرغة تحتوي على EDTA ويتم تخزينها في درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى الفحص الجزيئي لتعدد أشكال جين ألفا لمستقبلات هرمون الاستروجين
3-الفحص الجزيئي لتعدد الأشكال جين ألفا لمستقبلات الأستروجين
استخراج الحمض النووي:
إجمالي استخراج الحمض النووي من 100 ميكرولتر من عينات الدم الكامل باستخدام مجموعات Quick-DNA Miniprep المقدمة من (ZYMO RESEARCH) باتباع تعليمات الشركة المصنعة:
1. تمت إضافة 400 مايكرولتر من محلول التحلل الجيني إلى 100 ميكرولتر من الدم، وخلطها تمامًا عن طريق دوامة 4-6 ثوانٍ، ثم اتركها لمدة 5-10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
2. ينقل الخليط إلى عمود Zymo-spin C في أنبوب التجميع. جهاز طرد مركزي بقدرة 10000 × جم لمدة دقيقة واحدة. تم التخلص من أنبوب التجميع مع التدفق من خلاله.
3. تم نقل عمود Zymo-spin C إلى أنبوب تجميع جديد. تمت إضافة 200 ميكرولتر من محلول DNA قبل الغسيل إلى عمود الدوران وطرده عند 10000 × جم لمدة دقيقة واحدة.
4. تمت إضافة 500 200 ميكرولتر من محلول DNA قبل الغسيل إلى عمود الدوران وطرده عند 10000 × جم لمدة دقيقة واحدة.
5. 5. تم نقل عمود الدوران إلى أنبوب الطرد المركزي الدقيق النظيف، ثم تمت إضافة ≥50 ميكرولتر من محلول شطف DNA إلى عمود الدوران. حضنت لمدة 2-5 دقائق في درجة حرارة الغرفة ثم طردها بأقصى سرعة لمدة 30 ثانية لاستخراج الحمض النووي. يمكن استخدام الحمض النووي المزال على الفور للتطبيقات القائمة على الجزيئات أو تخزين ≤-20 درجة مئوية للاستخدام المستقبلي
بعد الاستخراج، تمت إضافة 10 ميكرولتر من مقايسة التنميط الجيني TaqMan المصمم مسبقًا (TaqMan Gene Expression master Mix، Applied Biosystem: USA) إلى 0.5 ميكرولتر من مقايسة SNP و6.5 ميكرولتر من H2 O و3 ميكرولتر من الحمض النووي (المجموع = 20 ميكرولتر) في الواقع تفاعل البلمرة المتسلسل الزمني (الخطوة الأولى من تفاعل البوليميراز المتسلسل RT).
تم إجراء التضخيم والتنميط الجيني لتعدد الأشكال لجين ألفا لمستقبلات هرمون الاستروجين باستخدام تعدد الأشكال أحادي النوكليوتيدات rs1 (2234693) للتنميط الجيني لـ ERα pvull (T وC الأليلات) وSNP rs2 (9340799) لـ ERα Xbal (الأليلات A وG).
أظهرت نتائج هذه الدراسة ما يلي:
1. ارتبط وجود ERα (rs1 2234693 Pvull polymorphism) (الأنماط الجينية TC وCC) بشكل رئيسي مع مرضى الذئبة الحمراء.
2. ارتبط تواتر الأليل C ارتباطًا وثيقًا بمرض الذئبة الحمراء.
3. تم العثور على النمط الجيني) ERα (rs1 2234693 Pvull polymorphism) (TT) بشكل رئيسي في مجموعة التحكم.
4. لم تكن ترددات) ERα (rs2 9340799 Xbal polymorphisms) (الأنماط الجينية AG و AA و GG) تختلف بشكل كبير بين مجموعات المريض والمجموعة الضابطة.
5. كان الجمع بين النمط الجيني TC / AA وCC / GG وCC / GG هو الأكثر انتشارًا بين مرضى الذئبة الحمراء، في حين أن التركيبة اللاحقة غائبة تمامًا عن المجموعة الضابطة.
6. ارتبطت هذه التركيبات الثلاثة مع 10 و28.6 و17.5 على التوالي، ارتفاع معدل الإصابة بمرض الذئبة الحمراء.
7. توجد علاقة ذات دلالة إحصائية بين التركيب الوراثي AA والاضطرابات العصبية.
8. كان تعدد الأشكال TC أكثر ارتباطًا بالتهاب الاغشية ونقص الكريات البيض والقيح، بينما ارتبط تعدد الأشكال AA مع قلة الكريات البيض فقط.
9. فرق غير ذي دلالة إحصائية بين كلا من rs1 وrs2 وعمر ظهور المرض أو مدة المرض
10. لم تكن هناك علاقة ذات دلالة إحصائية بين التنميط الجيني rs1 أو rs2 ودرجة مؤشر الضرر SLICC / ACR أو مع درجة SLEDAI
11. لا يوجد ارتباط بين درجات خزعة الكلى ووجود التنميط الجيني rs1 أو rs2.
12. لم يكن هناك ارتباط بين مظاهر القلب والأوعية الدموية وأي من تعدد الأشكال
13. لا توجد فروق ذات دلالة إحصائية بين مرضى الذئبة الحمراء ومجموعة السيطرة فيما يتعلق بمستويات هرمون الاستروجين.
الاستنتاجات والتوصيات
أوضحت هذه الدراسة أن وجود ERα (تعدد الأشكال Pvull) (الأنماط الجينية TC وCC) يبدو أنه مرتبط أكثر بمرضى SLE، مع زيادة تواتر أليل C المتحول، بينما تم العثور على النمط الجيني (TT) بشكل أساسي في المجموعة الضابطة. ارتبط التنميط الجيني (TC) بمظاهر سريرية محددة لمرض الذئبة الحمراء مثل التهاب الاغشية، والتقيح، ونقص الكريات البيض، في حين أن (الأشكال الجينية Xbal) (الأنماط الجينية AA وAG وGG) لم تكن مرتبطة بشكل كبير بالذئبة الحمراء، ولكن النمط الجيني AA كان مرتبطًا باضطرابات عصبية ودموية، وأكثر تحديدًا مع قلة الكريات البيض.
قد يشير هذا إلى أن وجود الأنماط الجينية TC وAA يؤدي إلى شكل عدواني من المرض مع ارتباط كبير بالاضطرابات الدموية وامراض الكلية والامراض العصبية، بينما يؤدي وجود الأنماط الجينية الأخرى إلى شكل أكثر اعتدالًا من المرض.
كانت مجموعات الأنماط الجينية TT / AA وCC / AG وCC / GG لمستقبلات هرمون الاستروجين alpha Pvull وXbal أكثر شيوعًا في مرضى الذئبة الحمراء وترتبط بارتفاع معدل الإصابة بالمرض.
قد تدعم هذه العلاقات بشكل غير مباشر مفهوم أن هرمون الاستروجين يؤثر على التسبب في مرض الذئبة الحمراء، ولدعم العلاقة بين مستقبلات هرمون الاستروجين ألفا متعدد الأشكال والذئبة الحمراء، يلزم إجراء دراسات أكبر تتضمن أولئك الذين يعانون من مرض الذئبة الحمراء في مرحلة الطفولة لفهم التأثير من تعدد الأشكال الجيني في ظهور مظاهر سريرية معينة للذئبة الحمراء.