الفهرس 
Table of Contents ......................................................................................................Only 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 223 |  |  |
| | | from | 223 | | |
Abstract
الصامتة مقارنةً بالتحكم السلبي، بينما بقيتانسر ، سنب٢٥ سيت٥ركاكنب ، بدكس، مافا، جسك، ، فامب٢ ، نيورود غير متأثرة.
درسنا بعد ذلك تأثير إسكات (مابك8اب١) على إفراز الأنسولين، وامتصاص الجلوكوز، وحيوية الخلية، وموت الخلايا المبرمج، وإنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية في خلايا الفئران غير المجهدة والمجهدة. أدى إسكات التعبير عن (مابك8اب١) في خلايا الفئران إلى تقليل إفراز الأنسولين ومعدل امتصاص الجلوكوز وإنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية في كل من الخلايا المجهدة وغير المجهدة. في المقابل، لم يتأثر محتوى الأنسولين، وحيوية الخلية، وموت الخلايا المبرمج بدون السيتوكينات. ومع ذلك، فإن إسكات (مابك8اب١) قلل بشكل كبير من موت الخلايا المبرمج الناجم عن السيتوكينات والموت الخلايا المبرمج في خلايا الفئران المجهدة. وبالتالي فشل إسكات(مابك8اب١) في الحفاظ على وظيفة الخلية بيتا ضد الاستجابة الالتهابية. تشير هذه النتائج إلى أن (مابك8اب١) تشارك في تنظيم خلايا بيتا من خلال مسارات متعددة.
الجين الثاني الذي تم فحصه هو عامل بدء حقيقيات النوى٤أ١. يلعب عامل بدء حقيقيات النوى٤أ١ دورًا حاسمًا في بدء ترجمة البروتينات حقيقية النواة حيث يعمل على فك البنية الثانوية للحمض النووي الريبزومي داخل المنطقة غير المترجمة 5 ′ من حمض الريبونوكلييك المرسال لتسهيل الارتباط الريبوزومي والمسح الضوئي. أظهر استكشاف تأثير حالة مرض السكري وارتفاع سكر الدم على التعبير عن حمض الريبونوكليك الرسول لهذا الجين زيادة كبيرة في حالة الجزر المصابة بمرض السكري مقارنة بالجزر غيرمصابة بالسكري او طبيعية سكر الدم وفي المتبرعين البدينين مقارنة بالمتبرعين النحيفين. ومع ذلك، لم يلاحظ أي اختلافات في تعبير الحمض النووي الريبي عن هذا الجين على أساس الجنس (ذكر مقابل أنثى) أو العمر. ومع ذلك، فإن التعبير عن عامل بدء حقيقيات النوى٤أ١. يرتبط ارتباطًا إيجابيًا بمستويات الهيموجلوبين السكري. بعد ذلك، قمنا بربط تعبير عامل بدء حقيقيات ا النوى٤أ١. بالتعبير عن الجينات الوظيفية الرئيسية لخلايا البنكرياس بيتا. فوجد ان تعبير عامل بدء حقيقيات النوى٤أ١قد ارتبط سلبًا بتعبيرانسيولين، بدكس، مافا، جسك وكسنج ١١ وبشكل إيجابي مع تعبير (نيورود) وارتباط غير مهم بمستقبلات الأنسولين وجلوت١. كشفت الارتباطات التعبيرية لعامل بدء حقيقيات النوى٤أ١. مع الجينات المنظمة للالتهاب في جزر البنكرياس أن تعبير عامل بدء حقيقيات ة النوى٤أ١. يرتبط ارتباطًا إيجابيًا بتعبير إنترلوكين١٨، وإنترلوكين ١ بيتا، وإنترلوكين ٦، والعامل النووي كابا بيتا 1 وكاسبيز١٣ بينما يرتبط عكسًا مع جزدرميند و بيكارد.و من ناحية أخرى ، لم تظهرنلرب٣، نلرب٩، نلزس٤ أيم ٢ ارتباط تعبيري مع عامل بدء حقيقيات النوى٤أ١.
لفهم تأثير عامل بدء حقيقيات النوى على وظيفة خلايا البنكرياس بيتا وعلى تنشيط الجسيم الملتهب، فقد استخدمنا مجموعة من متواليات الحمض الريبزومي النووي المتداخل الصغيرة لإزالة تعبيراتها في خلايا الفئران. ولوحظ انه عند تحليل التعبير لعامل بدء حقيقيات النوى بعد ترنسفكأيشن لمدة ٤٨ ساعة والتي تم تقييمها
ومن ناحية أخرى، لم تظهر أيم٢ ونلرب٩، نلرس٤ أي ارتباط تعبيري مع مابك٨أب١، وبذالك تكشف هذه النتائج أن تعبير مابك٨أب١ مرتبط بـ الجينات المرتبطة بالانفلامازوم الرئيسية في الجزر البشرية.
لفهم تأثير (مابك٨اب١) على وظيفة خلايا البنكرياس بيتا وعلى تنشيط الجسيم الملتهب، قمنا باستخدام مجموعة من تسلسلات حمض النووي الريبوزومي الصغير المتداخل لإزالة تعابيرها في خلايا الفئران. أظهر تحليل التعبير ل مابك٨اب لما بعد ٤٨ ساعة من العدوى، الذي تم تقييمه بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي، تعبيرًا أقل بشكل ملحوظ في الخلايا الصامتة (٨٢٪) مقارنة بخلايا التحكم السلبية التي تم تأكيدها من خلال تحليل اللطخة الغربية (٦٠٪). ثم قمنا بعد ذلك بالتحقيق في تأثير الإسكات على التعبيرعن الجينات الرئيسية المشاركة في تنشيط الجسيم الملتهب ووظيفة الخلية بيتا على كل من الخلايا المنقولة غير المجهدة والمرهقة على كلا من مستويات النسخ والترجمة.و تم ربط الإسكات المؤقت ل مابك٨ب١ للخلايا غير المجهدة بانخفاض كبير في مستويات الجينات المشاركة في التخليق الحيوي للأنسولين (انسولين ١ و ٢ و ماف ا) ، وجينات استشعار الجلوكوز(جلوت ٢ و جسك) ، وإشارات الأنسولين (انسر) والجينات التنظيمية للخلايا الخارجية للأنسولين (كاكنا١ا و فامب٢ وسيت٥) مقارنة بتلك الموجودة في الخلايا الضابطة.اما على مستويات البروتين ،فقد لوحظ انخفاض كبير في التنظيم في انسيولين غير الناضج في الخلايا الصامتة مقابل الخلايا الضابطة. أما بالنسبة للتعبير عن الجينات الرئيسية المشاركة في تنشيط الانفلامازوم، فقد لاحظنا انخفاضًا كبيرًا في مستويات الحمض انووي الريبوزومي المرسال، بما في ذلك انترلوكين١ب، نلرب٣، كاسبيز١، نلرس٤، جزدرمين، نلرب١ ،انترلوكين١٨ ،انترلوكين٦ مقارنة بخلايا التحكم. اما على مستويات البروتين،فقد لوحظ انخفاض كبير ف التنظيم في نلرب٣، جزدرمين كامل الطول والمشقوق وانترلوكين١ب الناضج والغير ناضج في الخلايا الصامتة غير المجهدة والمضغوطة مقابل الخلايا الضابطةو علي الجانب الاخر ، لم يتأثر التعبير البروتيني للكاسبيز غير المشقوق ، بينما انخفض مستوى تعبير الكاسبيز المشقوق.
أما بالنسبة لتأثير إسكات (مابك8اب١) على الخلايا المجهدة بعديد السكريد الدهني/حمض البالمتيك المقرن بالابومين المصلي البقري، فقد أظهر تحليل التعبير انخفاضًا ملحوظًا في مستوى تسلسلات حمض النووالريبوزومي المرسال للعديد من الجينات الرئيسية المشاركة في تنشيط الانفلامازوم منها انترلوكين١ب، نلرب٣، جزدرمين، نلرب١، انترلوكين١٨ ، انترلوكين٦واسك مقارنةً بالضوابط السلبية. وعلى مستوى البروتين، لاحظنا انخفاضًا كبيرًا في التعبيروالانقسام لجزدرمينو في التعبير والمعالجة داخل الخلايا نترلوكين الناضجه وغير. الناضجه وفي التعبير نلرب٣ في الخلايا مابك٨اب١ المجهدة الصامتة عند مقارنتها بالضوابط السلبية. علاوة على ذلك، فقد انخفض أيضًا تراكم جزدرمين المنشط في غشاء البلازما للخلايا المجهدة ذات الصمت، كما يتضح من الفحص المجهري متحد البؤر. ومن ثم، يبدو أن إسكات (مابك8اب١) يؤثر على التعبير عن الجينات المشاركة في التهاب الحموضة. أظهر تحليل التعبير لمستوى تسلسلات حمض النووي الريبزومي المرسال لجينات وظيفة الخلية بيتا انخفاضًا كبيرًا في انسيولين ١ و٢ وكاكانا١ا، جلوت2، في الخلايامابك٨اب١ المجهدة
بعد إظهار التعبير عن جينات الانفلامازوم وتنشيطها في خلايا البنكرياس، لا يزال دور الجينات المنظمة للالتهاب وتأثيرها على تنشيط الجسيم الملتهب ووظيفة الخلية بحاجة إلى مزيد من التحقيق. ولوحظ من استخدام بيانات الحمض. النووي الريبوزومي المتاحة للجمهور واستنادًا إلى التعبير التفاضلي بين المتبرعين بمرض السكري / ارتفاع السكر مقارنةً مع المتبرعون غير السكري / المعياري الطبيعي للسكر، تم اختيار اثنان من الجينات المرتبطة بالتهاب هما (مابك٨أب١ وإيف٤أ١) لمزيد من التحليل. وبذلك تمت محاولة إسكات التعبير عن اثنين من الجينات المرتبطة بالتهاب (مابك٨أب١ و إيف٤أ١) بواسطة الحمض النووي الريبوزومي الصغير المتداخل في خلايا الفئران ولوحظ تأثير هذا الإسكات على تنشيط الالتهاب ووظيفة الخلية.
مابك٨أب١ هو بروتين سقالة يتم التعبير عنه بشكل كبير في خلايا الدماغ والبنكرياس وتم تحديده على أنه جين مرشح محتمل لـ السكري النوع الثاني. ولقد أوضح استكشاف تأثير حالة مرض السكري / ارتفاع السكر في الدم على تعبير الحمض النووي الريبوزومي لـ مابك٨أب١ انخفاضًا كبيرًا في حالة الجزر الصغيرة المصابة بداء السكري / ارتفاع السكر في الدم مقارنة بالجزر غير السكري / الطبيعي وسكر الدم والمتبرعين الذين يعانون من السمنة المفرطة (مؤشر كتلة الجسم) مقارنة بالمتبرعين النحيفين (مؤشر كتلة الجسم). ومع ذلك، لم يلاحظ أي اختلافات في تعبير الحمض النووي الريبوزومي عن مابك٨أب١ بناءً على الجنس (ذكر، مقابل أنثى) أو العمر (المتبرعون كبار السن مقابل الشباب). ومع ذلك، فإن التعبير عن مابك٨أب١ يرتبط سلبًا بمستويات الهيموغلوبين المغلوز. بعد ذلك، قمنا بربط تعبيرمابك٨أب١ بالتعبير عن الجينات الوظيفية الرئيسية لخلايا البانكرياس. اتضح تعبير مابك٨أب١ بشكل إيجابي مع تعبير كسنج١١ وبدكس ومافا وجسك وفامب وسناب٢٥ و
أظهر تعبيرعلاقة جلوت وانسر بيتا٢ غير مرتبطة مع مابك٨أب١. كشفت ارتباطات تعبير مابك٨أب١ مع الجينات المرتبطة بالانفلامازوم في جزر البنكرياس أن تعبير مابك٨أب١ يرتبط ارتباطًا إيجابيًا مع نلرب٣ وجزدرمين د واسك بينما يرتبط عكسيًا مع تعبير انترليوكن ١٨ وانترليوكين ١ بيتا- وانترليوكين٦ كارد١٧كاسبايز١ والعامل النووي كابا بيتا.
كشف تحليل التعبير بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي أن عوامل الإجهاد المختلفة تسببت في تنشيط جينات الخلايا الالتهابية بدرجات مختلفة. وقد لوحظت زيادة كبيرة في مستويات الحمض النووي الريبوزومي للمعظم الجينات المشاركة في التجمع الالتهابي وتم تنشيطها عند اضافة مائتي ميكرومتر من حمض البالمتيك مقترنا بألبيومين المصل البقري مقارنةً بالثابت وعند احتضان الخلايا تحت ظروف نقص الأكسجين. ولقد تضمنت الجينات التى تم تنشيطها (نلرب١، نلرس٤، نلرب٣، كاسبيز١، جازدرمين د ، انترلكبن١بيتا، انترلكين١٨، انترلكين٦، العامل النووي كابا بيتا ١، ايم٢، جنك). والجدير بالذكر أن التعبير عن معظم الجينات الوظيفية المسئوله عن وظائف خلايا بيتا أظهرت انخفاضًا كبيرًا في تنظيمها مقارنةً بالثابت ولقد تضمنت الجينات الخاضعة للتنظيم السفلي ستة جينات وهم (مافا، انس١، انس٢، جلوت٢، انسر، كاكنا١ا). وأظهرت النتائج أن كلا من عديدالسكاريد الدهنى ثم حمض البالمتيك مقترنا بألبيومين المصل البقري ونقص الأكسجة يثبطان إفراز الأنسولين في خلايا الفئران. ، حيث أظهرانخفاضًا ملحوظًا عند استخدام ١٦.٧ ملي مولار من الجلوكوز وفي إفراز الأنسولين المحفز بكلوريد البوتاسيوم مقارنة بالثابت السلبي بينما أظهر نقص الأكسجة انخفاضًا كبيرًا عند استخدام ١٦.٧ ملي مولار من الجلوكوز في إفراز الأنسولين المحفز بكلوريد البوتاسيوم مقارنة بالثابت السلبي. وأظهرت النتائج أن كلا من حمض البالمتك وعديد السكريات المغلوز ونقص الأكسجة أدى إلى زيادة إنتاج عناصر الاكسجين التفاعلية، حيث ان حمض البالمتيك تسبب زيادة بنسبة ٢٠٪ ونقص الأكسجة يسبب زيادة بنسبة ١٥ ٪. اجمالا، استنادًا إلى التأثير على حياوية الخلية للحياة، وافراز الانسيلين المحفز بالجلوكوز، وإنتاج عناصر الاكسجين التفاعلية والتعبير عن الجينات الوظيفية الرئيسية، تم اختيار ١ ميكرومتر من عديد السكريات. المغلوز لمدة اربع ساعات متبوعا ب ٢٠٠ ميكرومتر من حمض البالمتيك كنظام اجهاد للتجارب المستقبلية لانه تسبب في اقصي قدر من التنشيط الالتهابي و الحد الاقصي من انتاج عناصر الاكسحين التفاعليه مع الحد الادني من التغيرات في حيوية الخلية ووظيفة خلايا بيتا
الملخص
تلعب بروتينات الانفلامازوم دورا مهما في آلية حدوث مرض السكري من النوع 2. ومع ذلك، فإن التغير الجيني لها وأهميتها الوظيفية في خلايا البنكرياس بيتا لا تزال غير معروفة إلى حد كبير. ولمعالجة هذه الفجوة في المعرفة ، أجرينا مجموعة من التجارب المعلوماتية الحيوية والجزيئية والوظيفية في الجزر البشرية وخلايا الفئران المسماه(INS − 1 (832/13). أظهر تحليل تعبير الحمض النووي الريبوزومي لـسته وعشرين جينا مرتبطا بالانفلامازوم أن (مابك١، العامل النووي كابا بيتا ١، عامل بدء حقيقيات النوى٤أ١( كانت من بين الجينات الأكثر تعبيرًا في الجزر البشرية، في حين أن (ايم٢، نلرس٤) من بين الجينات الأقل تعبيرا بواسطة الميكرو أري وتفاعل البلمرة المتسلسل الكمي استنادًا إلى قيم ∆Ct، وعلى الجانب الاخر أظهرت نتائج تحليل ملامح التعبير الجيني في خلايا الفئران INS − 1)) ان تعبير الجينات ( العامل النووي كابا بيتا١ ، نلرب١( زادت بدرجة كبيرة ، بينما تم التعبير عن جينين آخرين وهما ) كايبيز ، انترلوكين٦ (بمستويات أقل مقارنة بالجينات الأخرى.
ولفهم كيفية تأثير تنشيط الانفلامازوم على خلايا البنكرياس بيتا للفئران، قمنا بتقييم تأثير معالجة تلك الخلايا بتركيزات مختلفة من عوامل الإجهاد المختلفة بما في ذلك ١ميكروغرام من عديد السكاريد الدهني/ مل لمدة ٤ ساعات ثم حمض البالميتك مقترنا بألبيومين المصل البقري (٠.١ و.٠.٢٥ و ٠.٥ ملي مولار) أو الجلوكوز (٢٥ و٣٣.٣ مم) ، بيروكسيد الهيدروجين (١٠، ٥٠، ١٠٠ ميكرومتر) وتعريض الخلايا لظروف نقص الأكسجة. ثم اختبرنا تأثير هذه العوامل على حيوية الخلية وعلى ملامح التعبير عن الجينات الأساسية المشاركة في تنشيط الانفلامازوم ووظيفة الخلية وعلى إفراز الأنسولين. وتم تحليل حيوية الخلية باستخدام اختبار السميه الخلويه . وأظهرت النتائج أن استخدام عديد السكاريد الدهني ثم حمض البالمتيك مقترنا بألبيومين المصل البقري أدى إلى انخفاض كبير في قابلية الخلية للحياة بتركيزات ٢٠٠ ميكرومولر (" ~ " ١٥ ٪) و ٥٠٠ ميكرومولر (" ~ " ٣٧٪ ) ، بينما لم يلاحظ أي فرق كبير باستخدام ١٠٠ ميكرومولرمن حمض البالمتيك مقترنا بألبيومين المصل البقري عند مقارنته مع الثابت (الحامل منفردا). علاوة على ذلك، فإن تعريض الخلايا إلى ١٠٠ ملي مولار من بيروكسيد الهيدروجين أو احتضانها في ظروف نقص الأكسجين أدى إلى انخفاض كبير في الحيوية (٢٧.٤٪ ٣٤ ٪، على التوالي).
بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي، فقد اظهر تعبيرًا أقل بشكل ملحوظ في الخلايا الصامتة مقارنة بخلايا التحكم السلبية التي تم تأكيدها بشكل أكبر من خلال تحليل اللطخة الغربية. بعد ذلك ، قمنا بالتحقيق في تأثير الإسكات على التعبير عن الجينات الرئيسية المشاركة في تنشيط الجسيم الملتهب ووظيفة الخلية بيتا على كل من الخلايا المنقولة غير المجهدة والمرهقة على كلا من مستويات النسخ والترجمة .و لقد تم ربط الإسكات العابرلعامل بدء حقيقيات النوى في خلايا الفئران غير المضغوطة بانخفاض كبير في مستويات حمض الريبونوكليك المرسل للجينات المشاركة في التخليق الحيوي للأنسولين ، وجينات استشعار الجلوكوز ١ و جلوت ٢ والجينات التنظيمية للخلايا الخارجية للأنسولين مقارنة بتلك الموجودة في الخلايا الضابطة .اما على مستويات البروتين ،فقد لوحظ انخفاض كبير في التنظيم في انسولين بدكس١، جسك، جلوت٢، فامب، سناب٢٥ في الخلايا الصامتة مقابل الخلايا الضابطة بينما تم رفع مستويات مستقبلات الأنسولين بيتا و جنك. اما فيما يتعلق بالتعبيرعن الجينات المرتبطة بالانفلامازوم ، لاحظنا زيادة كبيرة في مستويات حمض الريبونوكليك المرسل للجي المرتبطة بالتهاب الجينات بما في ذلك إنترلوكين 1 بيتا ، كاسباس ، إنترلوكين 6 ، نلرب٣، نلرب١، نلرس٤ والعامل النووي كابا بيتا في الخلايا الصامتة غير المجهدة مقابل عناصر التحكم بينما في مستويات البروتين ، لوحظ هبوط كبير في جزدرمين د الطول الكامل والإنترلوكين 1 بيتا غير الناضج بينما تمت زيادة معالجتها إلى إنترلوكين 1 بيتا الناضج و جزدرمين د المشقوق بشكل ملحوظ.
فيما يتعلق بتأثير إسكات عامل بدء حقيقيات النوى على الخلايا المجهدة بعديد السكاريد الدهني/ بحمض البالمتيك المقرن بالالبومين المصلي البقري، أظهر تحليل التعبيرزيادة ملحوظة في مستوى حمض الريبونوكليك المرسل لعدد قليل من الجينات المرتبطة بالالتهاب بما في ذلك (الإنترلوكين 6، نلرب٤، نلرس٣) مقارنة بالضوابط السلبية. ومع ذلك، على مستوى البروتين، لاحظنا انخفاضًا كبيرًا في التعبير والمعالجة داخل الخلايا لإنترلوكين 1 بيتا غير الناضج حتى ينضج وفي التعبير والانقسام للجزدرميند في خلايا الفئران المجهدة الصامتة عند مقارنتها بالضوابط السلبية. أظهر تحليل تعبير الحمض الريبزومي النووي للركاب لجينات وظيفة الخلية بيتا انخفاضًا كبيرًا في انسيولين ١و٢انسولين، بدكس١، كاكنب١، سناب٢ في الخلايا المجهدة الصامتة مقارنةً بالتحكم السلبي، بينما بقيت (مافا، جسك، جلوت٢، نيورو د) غير متأثرين.
درسنا بعد ذلك تأثير إسكات عامل بدء حقيقيات النوى على إفراز الأنسولين، وامتصاص الجلوكوز، وحيوية الخلية، وموت الخلايا المبرمج، وإنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية في خلايا الفئران غيرالمجهدة والخلايا المجهدة. أدى إسكات التعبير عن عامل بدء حقيقيات النوى في خلايا الفئران إلى تقليل إفراز الأنسولين ومعدل امتصص الجلوكوز في كل من الخلايا المجهدة وغير المجهدة. على النقيض فإن حيوية الخلية، وإنتاج أنواع الأكسجن التفاعلية والنسبة المئوية لموت للخلايا المبرمج في وجود وغياب السيتوكينات زاد بشكل كبير في خلايا الفئران المجهدة الصامتة عند مقارنتها مع الضوابط السلبية. واجمالا فان هذه النتائج تشير إلى أن عامل بدء حقيقيات النوى متورط في فسيولوجيا خلايا بيتا البنكرياسية ووسيطًا مهمًا في الانفلامازوم للخلايا بيتا.
الصامتة مقارنةً بالتحكم السلبي، بينما بقيتانسر ، سنب٢٥ سيت٥ركاكنب ، بدكس، مافا، جسك، ، فامب٢ ، نيورود غير متأثرة.
درسنا بعد ذلك تأثير إسكات (مابك8اب١) على إفراز الأنسولين، وامتصاص الجلوكوز، وحيوية الخلية، وموت الخلايا المبرمج، وإنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية في خلايا الفئران غير المجهدة والمجهدة. أدى إسكات التعبير عن (مابك8اب١) في خلايا الفئران إلى تقليل إفراز الأنسولين ومعدل امتصاص الجلوكوز وإنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية في كل من الخلايا المجهدة وغير المجهدة. في المقابل، لم يتأثر محتوى الأنسولين، وحيوية الخلية، وموت الخلايا المبرمج بدون السيتوكينات. ومع ذلك، فإن إسكات (مابك8اب١) قلل بشكل كبير من موت الخلايا المبرمج الناجم عن السيتوكينات والموت الخلايا المبرمج في خلايا الفئران المجهدة. وبالتالي فشل إسكات(مابك8اب١) في الحفاظ على وظيفة الخلية بيتا ضد الاستجابة الالتهابية. تشير هذه النتائج إلى أن (مابك8اب١) تشارك في تنظيم خلايا بيتا من خلال مسارات متعددة.
الجين الثاني الذي تم فحصه هو عامل بدء حقيقيات النوى٤أ١. يلعب عامل بدء حقيقيات النوى٤أ١ دورًا حاسمًا في بدء ترجمة البروتينات حقيقية النواة حيث يعمل على فك البنية الثانوية للحمض النووي الريبزومي داخل المنطقة غير المترجمة 5 ′ من حمض الريبونوكلييك المرسال لتسهيل الارتباط الريبوزومي والمسح الضوئي. أظهر استكشاف تأثير حالة مرض السكري وارتفاع سكر الدم على التعبير عن حمض الريبونوكليك الرسول لهذا الجين زيادة كبيرة في حالة الجزر المصابة بمرض السكري مقارنة بالجزر غيرمصابة بالسكري او طبيعية سكر الدم وفي المتبرعين البدينين مقارنة بالمتبرعين النحيفين. ومع ذلك، لم يلاحظ أي اختلافات في تعبير الحمض النووي الريبي عن هذا الجين على أساس الجنس (ذكر مقابل أنثى) أو العمر. ومع ذلك، فإن التعبير عن عامل بدء حقيقيات النوى٤أ١. يرتبط ارتباطًا إيجابيًا بمستويات الهيموجلوبين السكري. بعد ذلك، قمنا بربط تعبير عامل بدء حقيقيات ا النوى٤أ١. بالتعبير عن الجينات الوظيفية الرئيسية لخلايا البنكرياس بيتا. فوجد ان تعبير عامل بدء حقيقيات النوى٤أ١قد ارتبط سلبًا بتعبيرانسيولين، بدكس، مافا، جسك وكسنج ١١ وبشكل إيجابي مع تعبير (نيورود) وارتباط غير مهم بمستقبلات الأنسولين وجلوت١. كشفت الارتباطات التعبيرية لعامل بدء حقيقيات النوى٤أ١. مع الجينات المنظمة للالتهاب في جزر البنكرياس أن تعبير عامل بدء حقيقيات ة النوى٤أ١. يرتبط ارتباطًا إيجابيًا بتعبير إنترلوكين١٨، وإنترلوكين ١ بيتا، وإنترلوكين ٦، والعامل النووي كابا بيتا 1 وكاسبيز١٣ بينما يرتبط عكسًا مع جزدرميند و بيكارد.و من ناحية أخرى ، لم تظهرنلرب٣، نلرب٩، نلزس٤ أيم ٢ ارتباط تعبيري مع عامل بدء حقيقيات النوى٤أ١.
لفهم تأثير عامل بدء حقيقيات النوى على وظيفة خلايا البنكرياس بيتا وعلى تنشيط الجسيم الملتهب، فقد استخدمنا مجموعة من متواليات الحمض الريبزومي النووي المتداخل الصغيرة لإزالة تعبيراتها في خلايا الفئران. ولوحظ انه عند تحليل التعبير لعامل بدء حقيقيات النوى بعد ترنسفكأيشن لمدة ٤٨ ساعة والتي تم تقييمها
ومن ناحية أخرى، لم تظهر أيم٢ ونلرب٩، نلرس٤ أي ارتباط تعبيري مع مابك٨أب١، وبذالك تكشف هذه النتائج أن تعبير مابك٨أب١ مرتبط بـ الجينات المرتبطة بالانفلامازوم الرئيسية في الجزر البشرية.
لفهم تأثير (مابك٨اب١) على وظيفة خلايا البنكرياس بيتا وعلى تنشيط الجسيم الملتهب، قمنا باستخدام مجموعة من تسلسلات حمض النووي الريبوزومي الصغير المتداخل لإزالة تعابيرها في خلايا الفئران. أظهر تحليل التعبير ل مابك٨اب لما بعد ٤٨ ساعة من العدوى، الذي تم تقييمه بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي، تعبيرًا أقل بشكل ملحوظ في الخلايا الصامتة (٨٢٪) مقارنة بخلايا التحكم السلبية التي تم تأكيدها من خلال تحليل اللطخة الغربية (٦٠٪). ثم قمنا بعد ذلك بالتحقيق في تأثير الإسكات على التعبيرعن الجينات الرئيسية المشاركة في تنشيط الجسيم الملتهب ووظيفة الخلية بيتا على كل من الخلايا المنقولة غير المجهدة والمرهقة على كلا من مستويات النسخ والترجمة.و تم ربط الإسكات المؤقت ل مابك٨ب١ للخلايا غير المجهدة بانخفاض كبير في مستويات الجينات المشاركة في التخليق الحيوي للأنسولين (انسولين ١ و ٢ و ماف ا) ، وجينات استشعار الجلوكوز(جلوت ٢ و جسك) ، وإشارات الأنسولين (انسر) والجينات التنظيمية للخلايا الخارجية للأنسولين (كاكنا١ا و فامب٢ وسيت٥) مقارنة بتلك الموجودة في الخلايا الضابطة.اما على مستويات البروتين ،فقد لوحظ انخفاض كبير في التنظيم في انسيولين غير الناضج في الخلايا الصامتة مقابل الخلايا الضابطة. أما بالنسبة للتعبير عن الجينات الرئيسية المشاركة في تنشيط الانفلامازوم، فقد لاحظنا انخفاضًا كبيرًا في مستويات الحمض انووي الريبوزومي المرسال، بما في ذلك انترلوكين١ب، نلرب٣، كاسبيز١، نلرس٤، جزدرمين، نلرب١ ،انترلوكين١٨ ،انترلوكين٦ مقارنة بخلايا التحكم. اما على مستويات البروتين،فقد لوحظ انخفاض كبير ف التنظيم في نلرب٣، جزدرمين كامل الطول والمشقوق وانترلوكين١ب الناضج والغير ناضج في الخلايا الصامتة غير المجهدة والمضغوطة مقابل الخلايا الضابطةو علي الجانب الاخر ، لم يتأثر التعبير البروتيني للكاسبيز غير المشقوق ، بينما انخفض مستوى تعبير الكاسبيز المشقوق.
أما بالنسبة لتأثير إسكات (مابك8اب١) على الخلايا المجهدة بعديد السكريد الدهني/حمض البالمتيك المقرن بالابومين المصلي البقري، فقد أظهر تحليل التعبير انخفاضًا ملحوظًا في مستوى تسلسلات حمض النووالريبوزومي المرسال للعديد من الجينات الرئيسية المشاركة في تنشيط الانفلامازوم منها انترلوكين١ب، نلرب٣، جزدرمين، نلرب١، انترلوكين١٨ ، انترلوكين٦واسك مقارنةً بالضوابط السلبية. وعلى مستوى البروتين، لاحظنا انخفاضًا كبيرًا في التعبيروالانقسام لجزدرمينو في التعبير والمعالجة داخل الخلايا نترلوكين الناضجه وغير. الناضجه وفي التعبير نلرب٣ في الخلايا مابك٨اب١ المجهدة الصامتة عند مقارنتها بالضوابط السلبية. علاوة على ذلك، فقد انخفض أيضًا تراكم جزدرمين المنشط في غشاء البلازما للخلايا المجهدة ذات الصمت، كما يتضح من الفحص المجهري متحد البؤر. ومن ثم، يبدو أن إسكات (مابك8اب١) يؤثر على التعبير عن الجينات المشاركة في التهاب الحموضة. أظهر تحليل التعبير لمستوى تسلسلات حمض النووي الريبزومي المرسال لجينات وظيفة الخلية بيتا انخفاضًا كبيرًا في انسيولين ١ و٢ وكاكانا١ا، جلوت2، في الخلايامابك٨اب١ المجهدة
بعد إظهار التعبير عن جينات الانفلامازوم وتنشيطها في خلايا البنكرياس، لا يزال دور الجينات المنظمة للالتهاب وتأثيرها على تنشيط الجسيم الملتهب ووظيفة الخلية بحاجة إلى مزيد من التحقيق. ولوحظ من استخدام بيانات الحمض. النووي الريبوزومي المتاحة للجمهور واستنادًا إلى التعبير التفاضلي بين المتبرعين بمرض السكري / ارتفاع السكر مقارنةً مع المتبرعون غير السكري / المعياري الطبيعي للسكر، تم اختيار اثنان من الجينات المرتبطة بالتهاب هما (مابك٨أب١ وإيف٤أ١) لمزيد من التحليل. وبذلك تمت محاولة إسكات التعبير عن اثنين من الجينات المرتبطة بالتهاب (مابك٨أب١ و إيف٤أ١) بواسطة الحمض النووي الريبوزومي الصغير المتداخل في خلايا الفئران ولوحظ تأثير هذا الإسكات على تنشيط الالتهاب ووظيفة الخلية.
مابك٨أب١ هو بروتين سقالة يتم التعبير عنه بشكل كبير في خلايا الدماغ والبنكرياس وتم تحديده على أنه جين مرشح محتمل لـ السكري النوع الثاني. ولقد أوضح استكشاف تأثير حالة مرض السكري / ارتفاع السكر في الدم على تعبير الحمض النووي الريبوزومي لـ مابك٨أب١ انخفاضًا كبيرًا في حالة الجزر الصغيرة المصابة بداء السكري / ارتفاع السكر في الدم مقارنة بالجزر غير السكري / الطبيعي وسكر الدم والمتبرعين الذين يعانون من السمنة المفرطة (مؤشر كتلة الجسم) مقارنة بالمتبرعين النحيفين (مؤشر كتلة الجسم). ومع ذلك، لم يلاحظ أي اختلافات في تعبير الحمض النووي الريبوزومي عن مابك٨أب١ بناءً على الجنس (ذكر، مقابل أنثى) أو العمر (المتبرعون كبار السن مقابل الشباب). ومع ذلك، فإن التعبير عن مابك٨أب١ يرتبط سلبًا بمستويات الهيموغلوبين المغلوز. بعد ذلك، قمنا بربط تعبيرمابك٨أب١ بالتعبير عن الجينات الوظيفية الرئيسية لخلايا البانكرياس. اتضح تعبير مابك٨أب١ بشكل إيجابي مع تعبير كسنج١١ وبدكس ومافا وجسك وفامب وسناب٢٥ و
أظهر تعبيرعلاقة جلوت وانسر بيتا٢ غير مرتبطة مع مابك٨أب١. كشفت ارتباطات تعبير مابك٨أب١ مع الجينات المرتبطة بالانفلامازوم في جزر البنكرياس أن تعبير مابك٨أب١ يرتبط ارتباطًا إيجابيًا مع نلرب٣ وجزدرمين د واسك بينما يرتبط عكسيًا مع تعبير انترليوكن ١٨ وانترليوكين ١ بيتا- وانترليوكين٦ كارد١٧كاسبايز١ والعامل النووي كابا بيتا.
كشف تحليل التعبير بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي أن عوامل الإجهاد المختلفة تسببت في تنشيط جينات الخلايا الالتهابية بدرجات مختلفة. وقد لوحظت زيادة كبيرة في مستويات الحمض النووي الريبوزومي للمعظم الجينات المشاركة في التجمع الالتهابي وتم تنشيطها عند اضافة مائتي ميكرومتر من حمض البالمتيك مقترنا بألبيومين المصل البقري مقارنةً بالثابت وعند احتضان الخلايا تحت ظروف نقص الأكسجين. ولقد تضمنت الجينات التى تم تنشيطها (نلرب١، نلرس٤، نلرب٣، كاسبيز١، جازدرمين د ، انترلكبن١بيتا، انترلكين١٨، انترلكين٦، العامل النووي كابا بيتا ١، ايم٢، جنك). والجدير بالذكر أن التعبير عن معظم الجينات الوظيفية المسئوله عن وظائف خلايا بيتا أظهرت انخفاضًا كبيرًا في تنظيمها مقارنةً بالثابت ولقد تضمنت الجينات الخاضعة للتنظيم السفلي ستة جينات وهم (مافا، انس١، انس٢، جلوت٢، انسر، كاكنا١ا). وأظهرت النتائج أن كلا من عديدالسكاريد الدهنى ثم حمض البالمتيك مقترنا بألبيومين المصل البقري ونقص الأكسجة يثبطان إفراز الأنسولين في خلايا الفئران. ، حيث أظهرانخفاضًا ملحوظًا عند استخدام ١٦.٧ ملي مولار من الجلوكوز وفي إفراز الأنسولين المحفز بكلوريد البوتاسيوم مقارنة بالثابت السلبي بينما أظهر نقص الأكسجة انخفاضًا كبيرًا عند استخدام ١٦.٧ ملي مولار من الجلوكوز في إفراز الأنسولين المحفز بكلوريد البوتاسيوم مقارنة بالثابت السلبي. وأظهرت النتائج أن كلا من حمض البالمتك وعديد السكريات المغلوز ونقص الأكسجة أدى إلى زيادة إنتاج عناصر الاكسجين التفاعلية، حيث ان حمض البالمتيك تسبب زيادة بنسبة ٢٠٪ ونقص الأكسجة يسبب زيادة بنسبة ١٥ ٪. اجمالا، استنادًا إلى التأثير على حياوية الخلية للحياة، وافراز الانسيلين المحفز بالجلوكوز، وإنتاج عناصر الاكسجين التفاعلية والتعبير عن الجينات الوظيفية الرئيسية، تم اختيار ١ ميكرومتر من عديد السكريات. المغلوز لمدة اربع ساعات متبوعا ب ٢٠٠ ميكرومتر من حمض البالمتيك كنظام اجهاد للتجارب المستقبلية لانه تسبب في اقصي قدر من التنشيط الالتهابي و الحد الاقصي من انتاج عناصر الاكسحين التفاعليه مع الحد الادني من التغيرات في حيوية الخلية ووظيفة خلايا بيتا
الملخص
تلعب بروتينات الانفلامازوم دورا مهما في آلية حدوث مرض السكري من النوع 2. ومع ذلك، فإن التغير الجيني لها وأهميتها الوظيفية في خلايا البنكرياس بيتا لا تزال غير معروفة إلى حد كبير. ولمعالجة ه